Fundo que reflete a atividade da Misericórdia desde a sua fundação em 1499 até ao século XX. Acervo é constituído por documentação de natureza religiosa, assistencial, social e administrativa, detalhada da seguinte forma: Inventários, registos de irmãos, compromissos (estatutos), tombos, acórdãos, provisões, códices factícios, livros de receita e despesa, e correspondência.
O conteúdo está organizado em torno das funções nucleares da instituição:
Governação e Regulamentação: Inclui os sucessivos Compromissos (desde a Provisão de D. Manuel I em 1520), regulamentos e estatutos que definem a orgânica da irmandade, bem como os livros de atas da Mesa e da Comissão Administradora.
Assistência e Caridade: Registos relativos ao apoio a "desprotegidos", doentes, forasteiros e peregrinos. Destacam-se o Livro de Livramento dos presos pobres da cadeia da vila de Barcelos e os registos de mamposteiros.
Gestão Financeira e Patrimonial: Documentação económica que reflete a sustentabilidade da Santa Casa, como Diários, Livros Razão, Balanços e Registos de Capitais Mutuados (empréstimos a juros feitos a nobres, agricultores e artistas).
Espiritualidade e Culto: Informação sobre capelas, legados pios, sufrágios e a gestão dos bens das gafarias e dos hospitais sob a tutela da Misericórdia.